帮我看下为啥WB加了ECL后一抹黑？？？-Agrisera公司询价-蚂蚁淘生物试剂代购

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帮我看下为啥WB加了ECL后一抹黑？？？

就从这个图上看啊有几个问题：1.底物是不是还都在膜上呈液体状到处流啊？感觉到处都是液体痕迹的背景。不知道你用的ECL说明书怎么样的，我们用的底物，都是先加到膜上，用枪头轻轻抹匀，作用5min后，要把液体稍微沥干一下，就是顺着边缘，在吸水纸上站一下，保证没有流动的液体了，再显影的，应该可以避免这种哪哪都有信号的情况。2.Marker如果透到下层滤纸，则说明有点过转了，如果蛋白marker分子量较大的条带都过转了，建议还是稍微调整一下转印时间，减少一点。Turbo应该是一个快速转印系统吧3. 如果这么短的曝光时间，就已经完全过曝了，你要看看二抗的浓度要再低一点。或者把底物沥掉可能会好点。4.看到图上左侧有几个泛白的条带，看起来像marker，蛋白肯定在膜上了，只等你调整了其他条件再看。

rosa9934 2018-01-14

展开引用rosa9934 就从这个图上看啊有几个问题：1.底物是不是还都在膜上呈液体状到处流啊？感觉到处都是液体痕迹的背景。不知道你用的ECL说明书怎么样的，我们用的底物，都是先加到膜上，用枪头轻轻抹匀，作用5min后，要把液体稍微沥干一下，就是顺着边缘，在吸水纸上站一下，保证没有流动的液体了，再显影的，应该可以避免这种哪哪都有信号的情况。2.Marker如果透到下层滤纸，则说明有点过转了，如果蛋白marker分子量较大的条带都过转了，建议还是稍微调整一下转印时间，减少一点。Turbo应该是一个快速转印系统吧3. 如果这么短的曝光时间，就已经完全过曝了，你要看看二抗的浓度要再低一点。或者把底物沥掉可能会好点。4.看到图上左侧有几个泛白的条带，看起来像marker，蛋白肯定在膜上了，只等你调整了其他条件再看。谢谢关注！1.确实我加ECL是用枪取A、B液各200μL，然后在离心管中混合再用枪滴加到目的条带附近，然后就马上在机器中曝光观察。下次我试一试你说的方法，反应5min沥干后再看。......

nfuyuer 2018-01-10

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